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                  一文讀懂進口熒光定量pcr儀原理及測量方法

                  發布時間:2020-09-03   點擊次數:171次
                   進口熒光定量pcr儀利用熒光素標記DNA分子,通過檢測樣品的熒光信號的強度來檢測聚合酶鏈式反應中核酸擴增的情況,將樣本加到納升反應體系的芯片中,實現PCR的定量檢測。主要用于基因表達、數字PCR分析、突變檢測分析、高相似背景下的基因分析、SNP分析等。  
                  使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。  
                  1.TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。而新型進口熒光定量pcr儀探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。  
                  2.SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的進口熒光定量pcr儀染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。  
                  3.分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光。
                  上海芮勱生物科技中心

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                  主營產品:進口熒光定量pcr儀,T100 PCR儀,伯樂電穿孔轉印系統

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